Bakteri üremesini ölçmenin birçok yolu vardır ve bunlardan biri diğerinden daha karmaşıktır. Bazen ölçümün tutarlılığının göz ardı edilmesi gerekmesine rağmen, bakteri üremesini doğru bir şekilde ölçmek için en kolay yol yeterlidir, bu nedenle sıklıkla kullanılır. En sık kullanılan yöntemler bakteri izleme ve sayma, kuru veya ıslak kütle ölçümü ve bulanıklık/bulanıklık seviyelerinin ölçülmesidir. Okulunuzun laboratuvarı, bu deneylerden en az birini gerçekleştirmek için gerekli araç ve gereçlere sahip olmalıdır.
Adım
Yöntem 1/3: Bakterileri Canlı İzleme
Adım 1. Malzemeleri hazırlayın
Hazırlanması gereken ve bir biyoloji laboratuvarında bulunmayabilecek birçok özel araç vardır. Deneyi çalıştırmadan önce tüm ekipmanı ve kapları hazırlayın, böylece işlem sırasında herhangi bir güçlük olmaz. Hemen kullanılan her bir bileşeni ve bu deneyin temel terimlerini bilmeniz gerekir.
- Sayma odasını hazırlayın. Yerleşik bir haznesi, mikroskop camı ve mikroskobu vardır, bu nedenle kurulumu ve kullanımı kolaydır. Bir laboratuvar veya okul malzemeleri mağazasından satın alabilirsiniz. Bu araç, tüm süreç boyunca size rehberlik edecek talimatlara sahip olmalıdır.
- Bir dökme kabı veya yayılmış bir kap hazırlayın. Bu kapların her ikisi de içindeki bakterileri izlemenizi sağlar.
- Kültür, bir deneyde organizmaların büyümesini tanımlamak için kullanılan bir terimdir.
- Et suyu, kültürün büyüdüğü sıvı bir ortamdır.
Adım 2. Dökme plakası veya yayma plakası yöntemini kullanın
Mikroskop kullanarak görüntülemek için bakterileri doğrudan tabağın üzerine de yerleştirebilirsiniz. Kültürü bir tabağa dökün ve mikroskop altına yerleştirin. Mevcut bakteri hücrelerinin sayısını izleyin.
Adım 3. Konsantrasyon dozunun doğru olduğundan emin olun
Çok fazlaysa, bakteriler birbiri üzerine yığılır ve yanlış hesap yapabilirsiniz. Daha fazla et suyu ile karıştırarak kültürü seyreltin. Çok az varsa, hesaplamanın sonuçları doğru olmayacaktır. Bir filtreleme sistemi kullanarak suyu süzün.
Adım 4. Bakterileri sayın
Son adım, bakterileri tek tek saymaktır. Sayma odasındaki büyüteçten bakın ve gördüğünüz bakteri sayısını yazın. Sonuçları diğer testlerin sonuçlarıyla karşılaştırın.
Yöntem 2/3: Kuru ve Islak Kütlenin Ölçülmesi
Adım 1. Doğru ekipmana sahip olduğunuzdan emin olun
Bu yöntem pahalı ekipman ve çok zaman kullanır. Laboratuarınızda ihtiyacınız olan ekipman yoksa, başka bir yöntem kullanmak iyi bir fikirdir. Ancak laboratuvarınız yeterince donanımlıysa, daha tutarlı sonuçlar sağladığı için bu yöntemi öneririz. Bu yöntemde ihtiyacınız olacak:
- Hidrolik yerçekimi konveksiyonlu fırın
- Alüminyumdan yapılmış tartım kabı
- Bir set şişe (laboratuvar şişeleri)
- Santrifüj makinesi (santrifüj) veya laboratuvar filtrasyon sistemi
Adım 2. Kültürün şişede olduğundan emin olun
Kültürü balkabağına ekleyin. Bu aşamada, kültür bir et suyu olmalıdır, ancak daha sonra tekrar ayrılacaktır.
Adım 3. Alüminyum tartım kabını laboratuvar fırınında kurutun
Bunun yerine 47 mm çapında ve 0,45µm gözenek boyutunda bir selüloz asetat filtre membranı kullanabilirsiniz. Hangi tartım kabını kullanırsanız kullanın, daha sonra bakteri hücreleri tartılırken düşülmesi gerekeceğinden tartın.
Adım 4. Şişedeki kültürü eşit şekilde karışana kadar karıştırın
Hücre, yerçekimi nedeniyle doğal olarak batacak ve şişeye eşit şekilde yayılması için karıştırılması gerekecektir. Bu şekilde daha fazla numuneye sahip olabilirsiniz.
Adım 5. Bakteri hücrelerini et suyundan ayırmak için bir santrifüj kullanın
Bu araç, şişeyi döndürür ve suyu tahliye edecek ve kültürü şişede bırakacak şekilde hızla dengelenir.
Adım 6. Kabak üzerindeki macunu kazıyın ve tartma kabına koyun
Et suyunu atın çünkü artık ihtiyacınız yok. Ancak balkabağından henüz kurtulmayın çünkü yine de kullanılacaktır.
Adım 7. Santrifüj makinesini durulayın ve durulama suyunu kaba dökün
Islak ağırlığı elde etmek için şişedeki durulama suyunu bakteri hücrelerinin üzerine bırakın.
Adım 8. Kuru ağırlığı bulun
Kuru ağırlığı ölçmek için kabı fırına koyun ve kullanılan fırın ve/veya tartım kabındaki talimatlara göre 100ºC'de 6-24 saat kurutun. Bakterilerin yanmaması için sıcaklığın çok yüksek olmadığından emin olun. Bittiğinde bakterileri tartın ve sonucu tartım kabının ağırlığı kadar azaltmayı unutmayın.
Yöntem 3/3: Bulanıklığın Ölçülmesi
Adım 1. Gerekli ekipmanı hazırlayın
Bir ışık kaynağına ve bir spektrofotometreye ihtiyacınız olacak. Her ikisi de laboratuvar malzemeleri mağazalarından temin edilebilir. Spektrofotometre, sahip olduğunuz modele göre cihazı kullanmanızda size rehberlik edecek talimatlara sahip olmalıdır. Spektrofotometrenin fiyatı oldukça uygun ve kullanımı kolaydır, bu nedenle bakteri üremesini ölçmek için en yaygın kullanılan yöntemlerden biri haline gelebilir.
Adım 2. Örneği aydınlatın
Layman'ın terimine göre, bulanıklık bir numunenin bulanıklık seviyesidir. NTU (Nefelometrik Bulanıklık Birimi) cinsinden ölçülen bulanıklık ölçüm numarasını almanız gerekir. Numuneyi doğru bir şekilde ölçebilmesi için bu aracın kalibre edilmesi gerekir.
Adım 3. Sonuçları kaydedin
Bulanıklık, numunedeki bakteri sayısından etkilenir. Spektrofotometre size iletim yüzdesini de (%T) söyleyecektir. Bulanıklık azalırsa bu rakam artacaktır. Bakteri üremesini ölçmek için sonuçları diğer testlerin sonuçlarıyla karşılaştırın.
Uyarı
- Bakteri kolonisi ile uğraştığınız için koruyucu gözlük ve eldiven gibi güvenlik ekipmanları kullanarak önlem alın. Özellikle çalışılan bakterinin türünü bilmiyorsanız, maske takmak da iyi bir fikirdir.
- Herhangi bir bakteri türüyle, hatta zararsız türüyle bile uğraşmadan önce önlem alın. Başlamadan önce vücudunuzdaki tüm açık yaraların tamamen kapandığından emin olun.
