Kimyada seyreltme, bir maddenin bir çözeltideki konsantrasyonunu azaltma işlemidir. Zincir seyreltme, seyreltme faktörünü hızla artırmak için bir çözeltinin tekrarlanan seyreltmesidir. Bu prosedür genellikle yüksek doğrulukta çok seyreltik çözeltiler gerektiren deneylerde gerçekleştirilir. Örneğin, logaritmik bir ölçekte konsantrasyon eğrilerini içeren deneyler veya bakterilerin yoğunluğunu belirleme deneyleri. Zincir dilüsyonları biyokimya, mikrobiyoloji, farmakoloji ve fizik gibi bilimsel deneylerde yaygın olarak kullanılmaktadır.
Adım
Yöntem 1/2: Temel Seyreltme Gerçekleştirme
Adım 1. Uygun seyreltici solüsyonunu belirleyin
Seyreltme için kullanılacak sıvının belirlenmesi çok önemlidir. Birçok çözelti damıtılmış suda çözünür, ancak bu her zaman böyle değildir. Bakterileri veya diğer hücreleri seyreltiyorsanız, bunu bir kültür ortamında yapın. Seçtiğiniz sıvı tüm zincir seyreltmelerinde kullanılacaktır.
Hangi seyrelticiyi kullanacağınız konusunda şüpheniz varsa, yardım isteyin veya internete bakın. Benzer zincir seyreltmeleri yapmış başkalarından örnekler arayın
Adım 2. 9 mL seyreltici içeren birkaç test tüpü hazırlayın
Boş seyreltmeler için test tüpleri kullanılır. İlk olarak, seyreltilmemiş numuneyi ilk tüpe koyun, ardından dilüsyonları bir sonraki tüplere sırayla yapın.
- Seyreltmeye başlamadan önce kullanılan tüm tüpleri etiketleyin, böylece deney çalışırken kafanız karışmaz.
- Her tüp, maddesi seyreltilmemiş tüpten başlayarak 10 dilüsyonla doldurulacaktır. İlk tüpteki seyreltme 1:10'dur, ardından ikinci tüpte 1:100, üçüncü tüp için 1:1000 ve bu şekilde devam eder. Seyreltici solüsyonunu boşa harcamamak için yapılması gereken seyreltme miktarını önceden belirleyin.
Adım 3. En az 2 mL seyreltilmemiş solüsyon içeren bir test tüpü hazırlayın
Bu zincir seyreltmesini gerçekleştirmek için gereken minimum seyreltilecek çözelti miktarı 1 mL'dir. Yalnızca 1 mL kullanırsanız, seyreltilmemiş çözelti kalmayacaktır. Seyreltilmemiş çözeltiler için BLM'yi etiketleyin.
Herhangi bir seyreltme işlemine başlamadan önce çözeltiyi iyice karıştırın
Adım 4. İlk seyreltmeyi gerçekleştirin
Bir pipetle BLM test tüpünden 1 mL seyreltilmemiş solüsyonu alın ve 9 mL seyreltici içeren 1:10 etiketli bir test tüpüne koyun ve ardından iyice karıştırın. Şimdi 9 mL seyreltici içinde 1 mL seyreltilmemiş solüsyon var. Böylece çözelti, 10'luk bir seyreltme faktörü ile seyreltilmiştir.
Adım 5. İkinci seyreltmeyi gerçekleştirin
İkinci dilüsyon için 1:10 tüpten 1 mL solüsyon alın ve ardından 9 mL seyreltici içeren 1:100 tüpe koyun. Bir sonraki tüpe eklemeden önce 1:10 tüpteki solüsyonun tamamen karıştığından emin olun. Yine 1:100 tüpteki seyreltmenin tamamen karıştığından emin olun. 1:10 tüpteki solüsyon 1:100 tüpte 10 kat seyreltildi.
Adım 6. Daha uzun zincir dilüsyonları gerçekleştirmek için bu prosedüre devam edin
Bu işlem, istenen çözelti konsantrasyonunu elde etmek için gerektiği kadar tekrarlanabilir. Konsantrasyon eğrilerini kullanan deneylerde, 1, 1:10, 1:100, 1:1.000 seyreltmelerle bir dizi çözelti üretmek için zincir seyreltmeler gerçekleştirebilirsiniz.
Yöntem 2/2: Seyreltme Faktörü ve Nihai Konsantrasyonun Hesaplanması
Adım 1. Zincir dilüsyonundaki son seyreltmenin oranını hesaplayın
Toplam seyreltme oranı, her adımdan son adıma kadar seyreltme faktörünün çarpılmasıyla belirlenebilir. Matematiksel gösterim, formül D'dir.T = D1 xD2 xD3 x…xD , NST toplam seyreltme faktörü ve D seyreltici oranıdır.
- Örneğin, 4 kez 1:10 seyreltme yaptığınızı varsayalım. Seyreltici faktörünü aşağıdaki formüle takın: DT = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Bu zincir seyreltmede dördüncü tüpteki seyreltici faktör 1:10.000'dir. Seyreltmeden sonraki maddenin konsantrasyonu, seyreltilmeden öncekinden 10.000 kat daha düşüktür.
Adım 2. Seyreltmeden sonra çözeltinin konsantrasyonunu belirleyin
Bir zincir seyreltmeden sonra bir çözeltinin son konsantrasyonunu belirlemek için, başlangıç konsantrasyonunu bilmeniz gerekir. Formül C'dirson = Cbaşlangıç/D, Cson seyreltilmiş çözeltinin son konsantrasyonudur, Cbaşlangıç orijinal çözeltinin başlangıç konsantrasyonudur ve D, önceden belirlenmiş seyreltme oranıdır.
- Örneğin: Konsantrasyonu mL başına 1.000.000 hücre olan ve seyreltme oranı 1.000 olan bir hücre solüsyonuyla başlarsanız, seyreltilmiş numunenin nihai konsantrasyonu nedir?
-
Formülü kullanarak:
- Cson = Cbaşlangıç/NS
- Cson = 1.000.000/1.000
- Cson = mL başına 1000 hücre.
Adım 3. Tüm birimlerin aynı olduğundan emin olun
Herhangi bir hesaplama yaparken, hesaplama sonunda birimlerin daima aynı olduğundan emin olun. İlk birim mL başına hücre ise, hesaplamanın sonunda birimlerin aynı kaldığından emin olun. İlk konsantrasyon milyonda parça (bpd) ise, son konsantrasyon da bpj biriminde olmalıdır.
